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内在性膜タンパク質は、それらは膜貫通ドメインの疎水性アミノ酸で複数回細胞膜にまたがっていることが多く、その独特な性質のために、内在性膜タンパク質の生化学的分析は容易ではありません。このプロトコールではネバダ大学が行った研究を紹介します。また、グリコシル化した膜タンパク質を扱う際のサンプル調製条件の検討方法のコツや、内在性膜タンパク質の適切なローディングコントロールに関する助言を提供しています。
ローディングコントロールでのノーマライゼーションに比べ、試料中に存在する総タンパク質量を用いて標的タンパク質の存在量を標準化する方法は、技術的なエラーを排除し、タンパク質発現の変化率を観察するためのより正確な方法です。Jessに搭載された簡単実行機能を用いると、Simple Westernサイズアッセイでノーマライゼーションを簡単に行うことができます。このテクニカルノートでは、順を追ってこのプロトコルを説明し、Jessでのタンパク質のノーマライゼーションが実際にHKPの方法より優れているということを示します。
Learn how Simple Western can characterize full signaling pathways with little sample volumes, offering picogram-level sensitivity, and high-throughput analysis overnight.
In this technical note, we’ll walk you through fluorescent multiplexing on Jess and provide you with guidance for developing an assay efficiently.
ＨＤＲはHigh Dynamic Range(高いダイナミックレンジ)を表します。写真撮影においては最初に露出を変えながら複数の画像を撮影した後で、特殊なアルゴリズムを用いて、これらの画像のベスト部分を組み合わせて自動的に最良のイメージを作成します。 SimpleWestern®のＨＤＲも同様なアルゴリズムに基づいています。 ダイナミックレンジが広がると、貴重なサンプルを無駄にしたり、アッセイの最適化に多くの時間を取られることもなくなります。アッセイの最適化の時間を短縮するために、アッセイの検出ステップとデータ解析の両方を強化するＨＤＲ検出プロファイルを利用してWesのダイナミックレンジを拡大しました。
English title: Superior Control of Simple Western Size Assays with a Dynamic Range Improvement
Jess, the newest Simple Western™ technology from ProteinSimple, allows you to not only run fully automated capillary-based Westerns, but she takes digital images of traditional chemiluminescent Western blot membranes. ProteinSimple’s AlphaView® software allows you to analyze Western blot images taken on Jess so that you can prepare publication-ready figures. In this tech note, we’ll show you how to export your images from Jess into AlphaView, and we’ll cover the tools that you’ll need to get the most out of your Westerns.
